細胞共培養實(shí)驗是將2種或2種以上的細胞共同培養在同一環(huán)境中的實(shí)驗，更好的模擬體內細胞互相通信的生理情況。一般有兩種共培養方法：1）直接接觸共培養體系：是指直接將2種或2種以上的細胞按照一定比例混合，鋪在一個(gè)孔中；2）間接接觸共培養體系：是指將不同種類(lèi)的細胞共用一種培養環(huán)境，而不互相接觸，查看細胞分泌因子對另外的細胞的影響。這里我們介紹的是采用間接接觸共培養的方法，研究CD34祖細胞的分泌物對由內皮細胞組成的細胞團在血管形成上的影響。

文中，研究人員將CD34祖細胞和內皮細胞團共培養后發(fā)現，CD34祖細胞使內皮細胞團血管生成的出芽長(cháng)度增長(cháng)了18%，如果在此基礎上將氧濃度從20%降低到1%，血管生成的出芽長(cháng)度增長(cháng)了52%。說(shuō)明CD34細胞和低氧情況都會(huì )促進(jìn)內皮細胞血管生成的發(fā)生。

Paracrine effects of CD34 progenitor cells on angiogenic endothelial sprouting

R. J. Scheubel, J. Holtz, I. Friedrich, J. Borgermann, S. Kahrstedt, A. Navarrete-Santos, R. E. Silber and A. Simm

International Journal of Cardiology, 2008, 10.1016/j.ijcard.2008.10.009

1. 實(shí)驗材料：

1. CD34細胞
2. HUVEC細胞團         1000個(gè)細胞/團
3. Collagen Gel
4. ECGM                內皮細胞生長(cháng)培養基
5. 共培養載玻片（圖一）          德國ibidi公司，81806

圖一：ibidi共培養載玻片特點(diǎn)，可見(jiàn)載玻片上有2個(gè)大孔，可以做兩組平行實(shí)驗。其中每個(gè)大孔中有9個(gè)小孔?？梢苑謩e鋪不同的細胞，細胞互相分開(kāi)而生長(cháng)在同一個(gè)培養環(huán)境中。

1. 實(shí)驗設計

1）將共培養載玻片上其中一個(gè)大孔中的9個(gè)小孔分為三列：左邊一列鋪入 7×104 的CD34祖細胞，中間和右邊兩列均按照每孔7個(gè)HUVEC細胞團與collagen gel相混鋪入每個(gè)孔中（圖二）。

圖二：實(shí)驗設計圖示。設計成三列可以對比不同濃度梯度下由CD34細胞旁分泌的細胞因子對細胞團血管生成的影響。

1. 對照組為*列不加入任何細胞，但仍使用collagen gel作為細胞基質(zhì)在剩下兩孔中加入HUVEC細胞團。
2. 低氧測試，將鋪好細胞的培養板再分為兩組，一組放入20%氧含量環(huán)境中37℃孵育30分鐘，另一組放入1%氧含量環(huán)境中37℃孵育30分鐘。
3. 在每個(gè)大孔中加入500μl內皮細胞培養基（ECGM），并繼續在相應的環(huán)境中培養24小時(shí)。
4. 以10%多聚甲醛終止實(shí)驗，并且每列至少選擇10個(gè)細胞團進(jìn)行血管生成出芽方向和長(cháng)度的測量和數據統計。

1. 實(shí)驗結果

1. 細胞團血管生成形態(tài)對比（圖三）：

圖三： 有CD34祖細胞存在的內皮細胞團的血管生成出芽具有方向性，而空白對照出芽沒(méi)有方向性。

1. 出芽長(cháng)度對比（圖四）：

圖四：a）無(wú)CD34的存在時(shí)，低氧環(huán)境使得血管生成出芽長(cháng)度有顯著(zhù)的提升。B）在同樣濃度下，CD34祖細胞也會(huì )使內皮細胞團的出芽長(cháng)度有顯著(zhù)的提升。

1. 20%氧濃度下，與CD34細胞共培養的細胞團血管生成出芽方向結果（圖五）：

圖五：在有CD34祖細胞的存在下，離CD34細胞近的細胞團血管生成出芽展現出一個(gè)方向特異性。

4）1%氧濃度下，與CD34細胞共培養的細胞團血管生成出芽方向結果（圖六）

圖六：在低氧的環(huán)境中，內皮細胞團對CD34祖細胞同樣有方向敏感性，離CD34細胞近的細胞團血管生成出芽展現出一個(gè)方向特異性。