細胞的免疫熒光實(shí)驗是一個(gè)基礎的細胞實(shí)驗，傳統的方法是在培養板中放入預先處理好的蓋玻片，待細胞貼壁后，使用鑷子將蓋玻片拿出再開(kāi)始進(jìn)行固定，染色等系列工作。

現在分享一種簡(jiǎn)便的免疫熒光方法，無(wú)需爬片，培養-操作-鏡檢，在一個(gè)培養皿/載玻片上完成所有工作！一氣呵成！

使用如圖的培養皿和載玻片，免疫熒光步驟將簡(jiǎn)化為：

1.直接細胞培養

2.沖洗玻片/培養皿

3.固定細胞

4.沖洗玻片/培養皿

5.染色

6.沖洗玻片/培養皿

7.凍存液處理細胞

8.直接鏡檢觀(guān)察

免去了指甲油封片的傳統免疫熒光方法中的冗長(cháng)步驟：

1.無(wú)需對蓋玻片和載玻片消毒滅菌

2.無(wú)需對蓋玻片進(jìn)行包被

3.無(wú)需等細胞爬片

4.無(wú)需指甲油封片

之所能如此簡(jiǎn)便完成免疫熒光實(shí)驗，是因為這些ibidi培養皿和載玻片的底部為特殊處理的材質(zhì)，絕大多數細胞可以直接貼壁生長(cháng)，而不需要另外包被。同時(shí)，這些耗材的底部薄如蓋玻片，可以直接使用倒置顯微鏡進(jìn)行觀(guān)察，得到高質(zhì)量的成像，適用于顯微鏡比如共聚焦顯微鏡。

成像效果：

下面再分享一種的免疫熒光方法，不僅更加簡(jiǎn)化實(shí)驗步驟，而且可以節約試劑和細胞，同時(shí)還能得到更出色的成像效果。

如圖的ibidi通道載玻片，簡(jiǎn)單快速完成免疫熒光實(shí)驗。

步驟：培養-固定-染色-鏡檢，只需在這個(gè)載玻片上進(jìn)行4個(gè)步驟，免疫熒光實(shí)驗輕松完成~

優(yōu)點(diǎn)總結：

1、節約細胞和試劑

ibidi通道載玻片里的通道只有400μm高，以μ-slide VI為例，通道的容積只有30μl，而普通8well的腔式載玻片一個(gè)孔的容積有300μl。這意味著(zhù)通道需要的試劑和細胞量?jì)H需約十分之一！對于非常珍貴的細胞和試劑來(lái)說(shuō)，這可是非常重要的。

2、成像效果好

使用通道載玻片時(shí)，能在相差顯微鏡下獲得更好的成像效果。因為通道上下都是平坦的，不會(huì )因為凹液面的折射現象影響到相差顯微鏡成像。而well式的開(kāi)放小室的相差成像會(huì )受到培養皿蓋和液面的折射現象影響。

3、細胞分布均勻

在通道載玻片中，由于沒(méi)有培養皿壁的影響，鋪入細胞后，不需要平時(shí)的混勻操作，細胞的分布就非常均勻了。而使用開(kāi)放小室，有可能在鋪細胞混勻后，細胞還是會(huì )聚集在小室的邊緣或上。如下圖所示。a 是明場(chǎng)相差成像，b為熒光成像。

免疫熒光本身就是個(gè)十分基礎的實(shí)驗，如今的科技更是便利了實(shí)驗，實(shí)驗也發(fā)展了科技。

以上方法分享給有需要的，奔跑在科研前沿的童鞋們~更快更省地做好免疫熒光噢！