在體內，各種其他參數對傷口愈合的影響更大，例如不同細胞類(lèi)型的相互作用。 使用 Culture-Insert插件的體外 ibidi 傷口愈合實(shí)驗將遷移速度與所有這些其他影響分開(kāi)，提供了一個(gè)客觀(guān)且可重復的實(shí)驗環(huán)境。

　　1、Culture-Inserts插件可以重復使用嗎？　　

　　盡管 Culture-Inserts 插件中的材料可高壓滅菌并且與酒精相容，但我們不建議重復使用。 如果您仍想嘗試重復使用，則需要建立一個(gè)用酸或堿的清潔程序。 ibidi沒(méi)有任何清潔Culture-Inserts插件的經(jīng)驗，雖然它們可能會(huì )保持粘性，但之前實(shí)驗的殘留可能會(huì )影響重現性。

　　2、可否在蓋玻片上使用 Culture-Inserts插件嗎？　　

　　可以，您可以在任何蓋玻片上使用 Culture-Inserts插件。 到目前為止，還沒(méi)被報告與任何干燥表面不相容。

　　3、是否可以使用 Culture-Insert 插件制作小于 500 µm 的傷口？　　

　　不可以，Culture-Inserts 插件中最小和標準的傷口尺寸是 500 µm。 Culture-Insert 4 Well /4孔插件會(huì )有一個(gè)額外的中心間隙，傷口大小為 1000 µm。

　　4、Culture-Insert 插件是如何固定在培養皿上的？　　

　　Culture-Insert 插件由生物相容的硅膠材料制成。 硅膠底部有一個(gè)粘性表面，可粘附（粘）在任何平坦、干燥、均勻的表面。 這種材料足夠柔軟可粘到表面上。 您可以用無(wú)菌鑷子按壓插件來(lái)簡(jiǎn)單地修復它?！　?/p>

　　5、您是否曾經(jīng)遇到過(guò) Culture-Inserts 插件無(wú)法粘附在定制涂層表面上的問(wèn)題？　　

　　只要表面干燥，我們從未遇到過(guò)讓 Culture-Inserts 插件粘附在定制涂層表面上的任何問(wèn)題。 但是，潮濕的表面會(huì )導致泄漏。 因此，請確保您的定制涂層表面*干燥。

　　6、需要在 Culture-Insert 插件中播種多少個(gè)細胞才能進(jìn)行細胞遷移實(shí)驗？　　

　　開(kāi)始遷移實(shí)驗時(shí)，Culture-Insert 插件中的細胞層應融合。 在所有實(shí)驗中，匯合細胞層的密度應盡可能一致。 使用的接種細胞數量取決于您的細胞類(lèi)型，因此您可以在 Culture-Insert 2 Well 說(shuō)明書(shū)中找到推薦的范圍和詳細方案。

　　7、為什么移除 ibidi Culture-Insert 插件后細胞有時(shí)會(huì )從蓋玻片上脫落？　　

　　以下是解釋細胞脫離的一些可能原因：　　

　　• 細胞密度太高。 --> 播種更少的細胞（細胞層應在 24 小時(shí)后生長(cháng)至  融合，但不能過(guò)度生長(cháng)）。有關(guān)傷口愈合試驗的詳細方案，請參閱：傷口愈合／細胞劃痕實(shí)驗新方法－如何劃出筆直均一的劃痕　　

　　• 細胞正在挨餓。 --> 增加每個(gè)插入孔的培養基體積，或在細胞生長(cháng)期間更換培養基?！　?/p>

　　• 在極少數情況下，細胞類(lèi)型不能很好地粘附在 ibiTreat 表面。 --> 首先，覆蓋蓋玻片表面以促進(jìn)細胞附著(zhù)。然后，在插入 ibidi Culture-Insert 插件之前讓涂層干燥?！　?/p>

　　以下是使用帶有涂層的 ibidi Culture-Inserts 插件以促進(jìn)細胞粘附的一些額外提示：　　

　　• 我們強烈建議提前測試移除ibidi Culture-Insert 插件是否會(huì )破壞遷移間隙中的涂層。這可以通過(guò)使用針對涂層蛋白的熒光標記抗體進(jìn)行分析。如果遷移間隙區域中涂層的熒光信號與開(kāi)放孔中的一樣均勻和強烈，則可以假設在插入物移除后是保持完好的。經(jīng)過(guò)幾次成功的測試后進(jìn)行實(shí)際實(shí)驗通常是安全的?！?/p>

　　• 如果去除插入物破壞了大部分涂層，則僅涂覆插件的孔，然后接種細胞。取出插件后，通過(guò)向培養基中添加低濃度涂層來(lái)填充間隙并孵育約 30 分鐘。之后，用普通介質(zhì)替換涂層溶液并繼續進(jìn)行遷移實(shí)驗?！　?/p>

　　8、當 Culture-Insert變干燥時(shí)，包被蛋白會(huì )失去活性嗎？　　

　　這主要取決于與 Culture-Insert 插件一起使用的蛋白質(zhì)類(lèi)型。 使用層粘連蛋白的人通常更喜歡在涂層和細胞接種之間保持水分。 根據我們的經(jīng)驗，當纖連蛋白和膠原蛋白 IV 干燥時(shí)，我們沒(méi)有發(fā)現對細胞遷移速度有任何影響。

　　9、有沒(méi)有辦法用懸液細胞進(jìn)行傷口愈合實(shí)驗，或者該實(shí)驗僅適用于貼壁細胞？　　

　　目前，使用 Culture-Insert插件的傷口愈合實(shí)驗只能用于貼壁細胞。 然而，單個(gè)細胞的遷移研究可以在 µ-Slide 趨化性中通過(guò)將細胞嵌入到3D基質(zhì)（例如，I 型膠原蛋白凝膠）中進(jìn)行。

　　10、是什么使 Culture-Inserts插件在細胞接種過(guò)程中不會(huì )泄漏？　　

　　Culture-Insert 插件由硅膠材料制成。 上部是粗料，下部是非常柔軟的材料，在按下 Culture-Insert 插件后會(huì )固定在表面上。 正確插入時(shí)是不會(huì )有任何泄漏的?！　?/p>

　　11、有時(shí)很難在 Culture-Insert 插件中看到細胞層的匯合。 您有什么建議？　　

　　當使用相差顯微鏡和小孔時(shí)，例如 Culture-Insert 插件或 96 孔板，空氣-水界面之間的彎月面會(huì )導致表面強烈彎曲。 這會(huì )破壞除孔中心以外的任何地方的相位對比效應?！　?/p>

　　一種解決方案是用細胞培養基*均勻地填充 Culture-Insert 的兩個(gè)孔。 通過(guò)這樣做，您可以在孔上方的介質(zhì)和空氣之間創(chuàng )建一個(gè)平面。 請記住，這可能會(huì )導致兩孔之間的交叉污染。

　　12、有時(shí)，細胞傾向于聚集在 ibidi Culture-Insert插件的邊緣。 怎樣才能避免這種情況？　　

　　當細胞在 Culture-Insert插件中生長(cháng)到非常高的密度時(shí)，會(huì )觀(guān)察到了這種情況。 為了減少細胞團塊，您應該在實(shí)驗開(kāi)始時(shí)使用較低的細胞密度。 然而，有時(shí)細胞會(huì )粘在與細胞相容的硅膠上。 在這種情況下，我們建議較少孵育時(shí)間和/或細胞數量。

　　13、Culture-Insert 如何在不造成細胞損傷的情況下模擬生理傷口？　　

　　使用體外實(shí)驗時(shí)，很難以可重復的方式模擬生理傷口。 當然，來(lái)自死細胞的碎片可能在與傷口愈合相關(guān)的遷移中發(fā)揮作用。 使用 Culture-Insert插件的 ibidi 傷口愈合實(shí)驗提供了可重復的、無(wú)損傷的細胞貼片。