你是否經(jīng)常使用相差顯微鏡來(lái)觀(guān)察你的細胞？那相差顯微鏡是如何工作的？為什么這種顯微鏡技術(shù)對科學(xué)家如此重要？相位對比如何使幾乎透明的細胞清晰可見(jiàn)？來(lái)吧，先睹為快。

　　什么是相差顯微鏡（Phas Contrast Microscopy）

　　相差顯微鏡是一種特殊的顯微鏡，特別適用于觀(guān)察具有很高透明度的對象，例如生物切片、油膜和位相光柵等等。光波通過(guò)這些物體，往往只改變入射光波的位相而不改變入射光波的增幅，由于人眼及所有能量檢測器只能辨別光波強度上的差別，也即振幅上的差別，而不能辨別位相的變化，因此用普通顯微鏡是難以觀(guān)察到這些物體的。透明度很高的物體，也稱(chēng)為位相物體。相襯法（也叫位相反襯法）是通過(guò)空間濾波器將物體的位相信息轉換為相應的振幅信息，從而大大提高透明物體的可分辨性，該方法使科學(xué)家能夠以高水平的細節觀(guān)察有機和生物樣品，而不需要進(jìn)行樣品制備、染色或標記。所以從這個(gè)意義上說(shuō)，相襯法是一種光學(xué)信息處理方法，而且是最早的信息處理的成果之一，因此在光學(xué)的發(fā)展-史-上具有重要意義。

　　相差顯微鏡和普通顯微鏡的區別是：用環(huán)狀光闌代替可變光闌，用帶相板的物鏡代替普通物鏡，并帶有一個(gè)合軸用的望遠鏡。

　　用途：相差顯微鏡主要用于觀(guān)察未經(jīng)染色的標本和活細胞。

　　基本原理：

　　相差顯微鏡利用物體不同結構成分之間的折射率和厚度的差別，把通過(guò)物體不同部分的光程差轉變?yōu)檎穹ü鈴姸龋┑牟顒e，經(jīng)過(guò)帶有環(huán)狀光闌的聚光鏡和帶有相位片的相差物鏡實(shí)現觀(guān)測的顯微鏡。主要用于觀(guān)察活細胞或不染色的組織切片，有時(shí)也可用于觀(guān)察缺少反差的染色樣品。

　　相差顯微鏡把透過(guò)標本的可見(jiàn)光的光程差變成振幅差，從而提高了各種結構間的對比度，使各種結構變得清晰可見(jiàn)。光線(xiàn)透過(guò)標本后發(fā)生折射，偏離了原來(lái)的光路，同時(shí)被延遲了1/4λ（波長(cháng)），如果再增加或減少1/4λ，則光程差變?yōu)?/2λ，兩束光合軸后干涉加強，振幅增大或減下，提高反差。在構造上，相差顯微鏡有不同于普通光學(xué)顯微鏡4個(gè)特殊之處：

　　1.環(huán)形光闌（annular diaphragm） 位于光源與聚光器之間，作用是使透過(guò)聚光器的光線(xiàn)形成空心光錐，焦聚到標本上。

　　2.相位板（annular phaseplate）在物鏡中加了涂有氟化鎂的相位板，可將直射光或衍射光的相位推遲1/4λ。分為兩種：

　?。?）A+相板：將直射光推遲1/4λ，兩組光波合軸后光波相加，振幅加大，標本結構比周?chē)橘|(zhì)更加變亮，形成亮反差（或稱(chēng)負反差）。

　?。?）B+相板：將衍射光推遲1/4λ，兩組光線(xiàn)合軸后光波相減，振幅變小，形成暗反差（或稱(chēng)正反差），結構比周?chē)橘|(zhì)更加變暗。

　　3.合軸調節望遠鏡 (centring telescope)：用于調節環(huán)狀光闌的像與相板共軛面-完-全吻合?！　?/span>

　　相差顯微鏡有哪些優(yōu)點(diǎn)？

　　相位對比顯微鏡的一個(gè)重要優(yōu)勢是可以自然地研究任何活細胞，而不需要固定、標記或染色。

　　該技術(shù)產(chǎn)生的所有圖像可以是無(wú)標簽的。這也為研究人員節省了時(shí)間，并減少了實(shí)驗之間出現錯誤或變化的機會(huì )。

　　相位對比法對透明樣品效果很好，因為額外的干擾使樣品更加明顯。在這種技術(shù)中，整個(gè)物體都被照亮了。

　　對于研究活細胞的細胞內成分，相襯顯微鏡提供了相對較高的分辨率。細胞線(xiàn)粒體、有絲分裂的染色體、空泡和其他活細胞成分都可以用這種方法來(lái)研究。

　　相差顯微鏡的組件也可以添加到幾乎所有類(lèi)型的光學(xué)顯微鏡中，只要相位物鏡符合顯微鏡的管長(cháng)參數，聚光器可以與正確尺寸的環(huán)形相位環(huán)聯(lián)姻。這使得它成為一種靈活和廣泛適用的技術(shù)。