想改善您的顯微鏡圖像嗎？您對自己的圖像總是這樣感到不滿(mǎn)嗎？別擔心，在這里ibidi雷萌將幫助您獲得精美的圖像！在這里，雷萌將向您展示彎液面的形成是如何干擾相位對比顯微鏡成像的。如何能獲得清晰且對比度良好的圖像？

相差成像　

　　到目前為止，相襯是生物光學(xué)顯微鏡中較常用的方法。它是細胞培養和活細胞成像中成熟的顯微技術(shù)。當使用這種廉價(jià)的技術(shù)時(shí)，無(wú)需預先固定或標記，就可以在自然狀態(tài)下觀(guān)察活細胞?！　?/span>

　　未染色的活細胞幾乎不吸收光。光吸收不良導致圖像中強度分布的差異極小。這使得細胞在明場(chǎng)顯微鏡下幾乎不可見(jiàn)或根本不可見(jiàn)。當光穿過(guò)細胞時(shí)，會(huì )發(fā)生小的相移，這是人眼看不到的。在相差顯微鏡中，這些相移被轉換成振幅的變化，可以觀(guān)察到圖像對比度的差異。然而，這種無(wú)標記技術(shù)在很大程度上取決于光路中組件的正確對齊。這種對準可能會(huì )受到自然發(fā)生的彎液面效應的干擾，從而導致相襯變弱?！　?/span>

　　相差顯微鏡要考慮的一個(gè)重要問(wèn)題是彎液面，它是在氣液界面自然形成的。這種現象會(huì )顯著(zhù)降低圖像質(zhì)量，尤其是在像標準96孔板這樣的小型培養孔中。由于彎液面而產(chǎn)生的衍射擾亂了光路內相位環(huán)和相位板的正確對準?！　　　?/span>

　　左邊具有彎液面的光束路徑未對準，右邊是無(wú)彎液面的光路對準正確，相位對比良好?！　?/span>

　　如何避免彎液面？　　　

　　ibidi開(kāi)發(fā)出了多種解決方案完-美-地解決了這個(gè)問(wèn)題——并保證出色的相位對比圖像：　　

　　* ibidi μ-Slide 15孔3D載玻片和μ-Plate 96孔3D載玻片　　

　　* ibidi channel μ-Slides通道載玻片　　

　　* ibidi μ-Slides PH+　

　　* ibidi μ-Dish 35 mm Quad四區塊 高壁培養皿　　

　　μ-Slide 15孔3D載玻片 (formerly μ-Slide Angiogenesis)和μ-Plate 96孔3D載玻片 (formerly μ-Plate Angiogenesis 96 Well)　　　　

　　ibidi μ -Slide 15 Well 3D 和μ-Plate 96 Well 3D （下圖右）提供理想的細胞培養容器：　

　　1）可獲得出色的相差圖像；　　

　　2）一種-獨-特-的幾何技巧，即“孔中孔"技術(shù)，抑制了彎液面的形成，并在整個(gè)觀(guān)察區域產(chǎn)生了良好的相位對比?！　?/span>

　　而普通的細胞培養容器（下圖左）：　　

　　1）氣液界面彎液面：大部分觀(guān)察區域相差較差?！　?/span>

　　2）凝膠表面的彎液面：不可能同時(shí)聚焦所有細胞?！　?/span>

　　ibidi channel μ-Slides通道載玻片　　

　　ibidi channel μ-Slides通道載玻片為相差顯微鏡提供了理想的光學(xué)條件。培養細胞時(shí)，通道自下而上充滿(mǎn)培養基。這在幾何上抑制了彎液面的形成，并在整個(gè)通道中實(shí)現了出色的相差?！　　　?/span>

　　ibidi μ-Slides PH+　　

　　ibidi μ-Slides PH+（有2 Well Ph+、4 Well Ph+兩種規格）專(zhuān)為相差顯微鏡設計。每個(gè)孔中的特殊中間擋板可避免彎液面形成并保證出色的相差——無(wú)論孔的那個(gè)部分都能完-美-成像?！　　?/span>

　　使用μ-Slide 2 Well Ph+、4 Well Ph+可減少彎液面，增加對比度良好的細胞面積。這種良好的對比是由于中間擋板產(chǎn)生的平行光束路徑?！　?/span>

　　Ph+孔與標準孔的比較：Ph+孔無(wú)彎液面效應　　　　

　　ibidi μ-Dish 35 mm Quad四區塊 高壁培養皿　　

　　中心擋板提供-卓-越-的相位對比度　　　

　　ibidi μ-Dish 35mm Quad四區塊高壁培養皿（左圖）居中的中間擋板減少了彎液面的形成，從而實(shí)現了出色的相位對比光學(xué)。同時(shí)，這種Ph+特征有利于細胞的均勻分布?！　?/span>

　　就像ibidi μ-Slide 2 Well Ph+和μ-Slider 4 Well Ph+一樣，μ-Dish 35mm Quad四區塊高壁培養皿將出色的細胞生長(cháng)和出色的高分辨率顯微鏡結合在一起，無(wú)論是使用相差顯微鏡還是熒光顯微鏡?！　?/span>

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