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摘要:全自動(dòng)樣品快速研磨儀對水稻研磨葉片研磨實(shí)驗主要目的是滿(mǎn)足分子標記輔助育種中基因型鑒定、基因克隆、測序的需要,本研究借用棉簽等具吸附功能的材料代替移液器,依次直接在2種DNA提取液中操作,建立了一種簡(jiǎn)單、快速、環(huán)保的水稻葉片DNA提取方法。結果表明,提取溶液通過(guò)PCR擴增,滿(mǎn)足基因擴增對模板的要求。
同時(shí),對其進(jìn)行了靈敏度測試,稀釋107倍仍然能夠擴增出目標片段;最后通過(guò)PCR、克隆載體連接等分子生物學(xué)手段,驗證此方法也滿(mǎn)足測序的需要。本方法能夠在90s內完成植物葉片DNA的提取,解決了目前植物基因組DNA提取方法需要離心機等昂貴特殊設備、提取步驟繁鎖、提取過(guò)程中刺激味大、提取時(shí)間長(cháng)等問(wèn)題,有利于大規模開(kāi)展分子標記輔助育種中材料基因型的鑒定,具有簡(jiǎn)單、快速、廉價(jià)、環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)。
實(shí)驗目的:擬測試全自動(dòng)樣品快速研磨儀對水稻葉片的前處理研磨效果
1.測試對象:上海凈信全自動(dòng)樣品快速研磨儀,型號為JXFSTPRP-24L
2.工作原理:樣品(水稻葉片)放入離心管中,放入研磨球,通過(guò)研磨儀的高速上下振蕩帶動(dòng)研磨珠進(jìn)行粉碎樣品。
3.實(shí)驗器材:上海凈信全自動(dòng)組織研磨儀主機,水稻葉片若干,離心管和不銹鋼研磨珠兩顆,提取試劑
水稻葉片樣品前處理研磨實(shí)驗操作步驟:
一、需要根據樣品量及樣品實(shí)驗研磨需求,去對組織研磨儀設備的程序參數的研磨頻率及研磨時(shí)間進(jìn)行設置
二、需要把水稻葉片剪成小段后,再放入凈信離心管中,再在離心管內加入適量的氧化鋯珠和相應提取試劑
三、再把離心管放入機器的適配器中,但需要注意對適配器的配平和緊固,再鎖蓋
四、啟動(dòng)設備,即可開(kāi)始程序的運轉研磨
五、待程設備程序停止運轉后,即可完成樣品粉碎,便可獲得磨后的樣品效果
水稻葉片樣品前處理研磨實(shí)驗效果:
研磨前后效果圖
注:全自動(dòng)樣品快速研磨儀在針對樣品葉片的研磨時(shí),需要盡可能的添加提取試劑,讓樣品在實(shí)驗研磨過(guò)程中有液體的情況下,可使樣品研磨效果會(huì )更加的充分。