免疫熒光(IF)是使用顯微鏡深入了解細胞結構和過(guò)程的有效方法，可評估特定蛋白質(zhì)的表達和位置，使得免疫熒光成為科學(xué)家解決許多細胞生物學(xué)問(wèn)題的工具。

　　免疫熒光實(shí)驗基于以下主要步驟：　　

　　1.特異性抗體與感興趣的蛋白質(zhì)結合?！　?/p>

　　2.熒光染料與這些免疫復合物偶聯(lián)，以便使用顯微鏡觀(guān)察感興趣的蛋白質(zhì)?！　?/p>

　　內皮細胞中vWF的免疫熒光染色。肌動(dòng)蛋白用phalloidin染色(綠色)，細胞核用DAPI染色(藍色)。

　　區分直接和間接免疫熒光。在直接免疫熒光中，一抗直接偶聯(lián)到熒光團（也稱(chēng)為熒光色素），便于處理和快速可視化。在間接免疫熒光中，使用特異性結合一抗的二級熒光團偶聯(lián)抗體來(lái)可視化感興趣的結。

　　盡管di二種方法比直接免疫熒光更耗時(shí)，但它有幾個(gè)顯著(zhù)的優(yōu)勢，比如它通常更便宜，因為二抗可以用于不同的一抗。此外，通過(guò)結合多個(gè)一抗和特定的二抗(每個(gè)抗體都用不同的熒光團標記)，可以在單個(gè)樣品中平行特異地顯示多個(gè)蛋白質(zhì)(多色免疫熒光)?！　?/p>

　　免疫熒光染色：典型的工作流程

　　每個(gè)免疫熒光染色方案由培養、固定、染色、成像四個(gè)主要步驟組成，可細分如下：　　

　　免疫熒光染色是一種非常敏感的方法，可能需要排除故障《免疫英冠染色故障排除指南》。方案中的微小變化可能會(huì )導致不同的結果，而這些結果不再具有可比性。因此，在您的特定方案中精確地保持相同的條件是非常重要的(例如，細胞密度、抗體稀釋度、培養溫度和培養時(shí)間)?！　?/p>

　　免疫熒光實(shí)驗方案對比

　　傳統染色與ibidi方案染色

　　當使用任何ibidi解決方案時(shí)，ibidi的免疫熒光染色方案比傳統方案要簡(jiǎn)便快速的多。無(wú)需在松散的蓋玻片上生長(cháng)細胞，細胞可直接在ibidi玻片上生長(cháng)和染色?！　?/p>

　　用于免疫熒光應用的各種ibidi產(chǎn)品