細胞趨化性（Chemotaxis，亦被稱(chēng)為化學(xué)趨向性）是趨向性的一種，指細胞、細菌及其他單細胞、多細胞生物依據環(huán)境中某些化學(xué)物質(zhì)而趨向的運動(dòng)。趨化性對細胞的發(fā)展和其他正常功能一樣*。EphA3在間充質(zhì)細胞（eMSCs）中發(fā)現表達，但沒(méi)有在其他的血管連接組織有表達。澳大利亞的科研人員發(fā)現在人間充質(zhì)細胞（MSCs）中表達的EphA3能夠在成人血管生成的早期發(fā)揮作用。在研究MSCs細胞對于血管生成的信號相應的實(shí)驗中， 研究人員使用過(guò)表達EphA3的MSCs處于EphA3的一個(gè)“興奮劑”IIIA4的一個(gè)穩定的濃度梯度中，可以觀(guān)測到過(guò)表達EphA3的MSCs對高濃度的IIIA4有負趨向行為。IIIA4是一個(gè)能使EphA3活化的抗體，研究表明IIIA4活化EphA3的MSCs減少了細胞間的，從而推斷出EphA3對于MSCs的定位有著(zhù)非常重要的作用。

Hypoxia-Controlled EphA3 Marks a Human Endometrium-Derived Multipotent Mesenchymal Stromal Cell that Supports Vascular Growth

C. To, R. Farnsworth, M. Vail, C. Chheang, C. Gargett, C. Murone, C. Llerena, A. Major, A. Scott and P. Janes

PloS one, 2014, 10.1371/journal.pone.0112106

1. 實(shí)驗材料準備：

• 倒置顯微鏡，具有10X相差物鏡和定時(shí)拍照功能
• 鏡載加熱孵育系統（37℃，5%CO2）
• 可選配置：全自動(dòng)載物臺，自動(dòng)對焦系統
• 分析軟件：手動(dòng)分析軟ImageJ的“Manual Tracking”模塊和ibidi公司的“Chemotaxis and Migration Tool” 進(jìn)行數據統計分析。
• EphA3+ eMSC 細胞
• X-lkd IIIA4抗體
• 細胞趨化載玻片（圖一）        （ibidi）

圖一，ibidi 細胞趨化載玻片圖示，如圖所示，細胞種在中間通道，兩邊的儲液池可以放不同的刺激因子，從中間通道的觀(guān)測可以得到細胞對刺激因子的趨向性，本例是使用一邊加入X-lkd IIIA4抗體，另外一邊放入培養基作為實(shí)驗組，兩邊都放培養基作為對照組。 

1. 細胞趨化實(shí)驗

1. 實(shí)驗步驟

• 將細胞直接加入ibidi細胞趨化載玻片的中間通道中（圖二）

圖二，在觀(guān)測通道中加入細胞-基質(zhì)膠混合液

• 將細胞趨化載玻片放入培養箱中30-35分鐘，等待細胞貼壁
• 細胞貼壁后分別在兩邊儲液池中加入60μl的X-lkd IIIA4抗體和無(wú)化學(xué)趨化物培養基作為細胞趨化實(shí)驗（+/-）（圖三）

圖三：加入X-lkd IIIA4抗體（紅色）和無(wú)化學(xué)趨化物培養基（藍色）

• 在兩邊儲液池中均加入60μl的無(wú)化學(xué)趨化物培養基作為空白對照（-/-）（圖四）

圖四：加入無(wú)化學(xué)趨化物培養基（藍色）作為空白對照

• 按說(shuō)明，將通道加液孔塞緊后可以進(jìn)行圖像采集
• 將載玻片置入鏡載加熱孵育系統中，調整好采集位點(diǎn)，進(jìn)行18小時(shí)的觀(guān)測，每20分鐘采集一張圖片

1. 圖像數據處理

1. 手動(dòng)細胞軌跡追蹤

• 下載ImageJ，并安裝Manual Tracking模塊
• 導入采集的系列圖像到ImageJ中，打開(kāi)模塊“Manual Tracking”，選擇“Add track”開(kāi)始記錄細胞軌跡
• 選擇一個(gè)細胞，按照時(shí)間點(diǎn)單擊細胞，*點(diǎn)擊后，會(huì )有新窗口跳出來(lái)顯示初始位置，以后每次點(diǎn)擊，都將在這個(gè)新窗口中產(chǎn)生一個(gè)該細胞隨著(zhù)時(shí)間的新坐標
• 統計完足夠的細胞軌跡后，保存軌跡坐標表格
• 至少收集30個(gè)細胞的軌跡才具有統計學(xué)意義，避免同一細胞追蹤兩次，去除由于凋亡會(huì )而不能采集完整的軌跡的細胞

2）全自動(dòng)細胞軌跡追蹤

使用ibidi的WimTaxis自動(dòng)分析平臺，將采集的系列圖像上傳到該平臺，幾個(gè)工作日后，會(huì )得到細胞軌跡的坐標表格數據結果。

四、實(shí)驗結果：

圖五：如圖所示，在沒(méi)有趨化因子存在時(shí)，細胞運動(dòng)沒(méi)有趨向性，顯示出無(wú)序性。當X-lkd IIIA4抗體存在時(shí)，細胞趨向遠離X-lkd IIIA4抗體濃度高的區域。具有對X-lkd IIIA4抗體的負趨向性。