ASAP1調節以F-actin為基礎的結構和功能，比如定點(diǎn)粘附性（focal adhesions, FAs）,質(zhì)膜折皺（circular dorsal ruffles，CDRs），細胞伸展和遷移。ASAP1需要N端的BAR基團發(fā)揮作用。美國的科學(xué)家發(fā)現nonmuscle myosin 2A(NM2A)在體外實(shí)驗中與ASAP1的BAR-PH串聯(lián)體直接結合?？茖W(xué)家用co-IP的方法在細胞內定位了ASAP1和NM2A發(fā)現，如果下調ASAP1將會(huì )減少細胞內NM2A和F-actin，并且會(huì )對細胞遷移，FAs，細胞伸展和CDRs都造成影響。

本實(shí)驗中，將NIH3T3成纖維細胞種在腔室載玻片中，并在一天后，采用固定時(shí)間間隔連續拍照的方式在采集結果，并且分析細胞遷移的軌跡。一般NM2A激活后，會(huì )抑制細胞遷移能力。在用siRNA下調NM2A或ASAP1的細胞的遷移能力有顯著(zhù)的提升。

J Biol Chem. 2016 Apr 1;291(14):7517-26. doi: 10.1074/jbc.M115.701292. Epub 2016 Feb 17

The Arf GTPase-activating Protein, ASAP1, Binds Nonmuscle Myosin 2A to Control Remodeling of the Actomyosin Network..

Chen PW, Jian X, Heissler SM, Le K, Luo R, Jenkins LM, Nagy A, Moss J, Sellers JR, Randazzo PA

一、實(shí)驗材料

1）細胞： NIH3T3    

2）試劑： fibronectin（10 μg/ml, Calbiochem）

          無(wú)酚紅DMEM培養基

          雙抗

3）培養耗材：µ-Slide 8孔腔室載玻片，ibiTreat底部處理 （ibidi，Germany，80826）

二、實(shí)驗方法

一）載玻片包被

①　每孔加入300μl 的  10 μg/ml的fibronectin溶液

②　室溫孵育60分鐘

③　吸除所有液體并小心用PBS沖洗5-10分鐘，即可開(kāi)始使用

二）細胞遷移實(shí)驗

1）鋪細胞，每孔鋪約10000個(gè)細胞，過(guò)第二天培養

2）置于倒置顯微鏡上，用20X倍鏡觀(guān)察

3）每8分鐘采集一張圖片，持續5.5-6.5個(gè)小時(shí)

4）使用ImageJ分析細胞遷移軌跡。

三、實(shí)驗結果

如圖所示，下調ASAP1或NM2A后，細胞遷移的距離和遷移的速度都有顯著(zhù)的增長(cháng)。